ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)靈敏度高的原因

ELISA試劑盒試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

ELISA試劑盒試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因及解決辦法分析：

1 選擇試劑

選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

2 加樣可能原因：

1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；

2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))；

3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。

ELISA試劑盒解決辦法：

1） 標(biāo)本為血清：最好將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。

2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。

3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。

5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。

3 孵育可能原因：

1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗che底；

2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)y以清洗che底。