恒遠生物|細胞復蘇

細胞復蘇的原則

快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。

一. 實驗前準備：

1.將水浴鍋預熱至37℃

2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。

3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶等。

二．取出凍存管：

1.根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。

2.從液氮罐中取出細胞盒，取出所需的細胞，同時核對管外的編號。

三．迅速解凍：

1.迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化。

2.約1-2min后凍存管內液體溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺內。

四.平衡離心：

用架盤天平平衡后，放入離心機中3000r/min 離心3min 

五.制備細胞懸液：

1.吸棄上清液。

2.向離心管內加入10ml培養液，吹打制成細胞懸液。

六.細胞計數：

細胞濃度以5×105/ml為準。

七.培養細胞：

將復合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內，將培養瓶放入37℃5％CO2的培養箱內2-4小時（或者24-48小時）后換液繼續培養培養，換液時間由細胞情況而定。

特別注意初學者常犯的錯誤：

1水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。

2.水浴鍋內凍存管太多，導致傳熱不佳，使融化時間延長。

3.離心前忘記平衡，導致離心機損壞和細胞丟失。

4.一次復蘇細胞過多，忘記更換吸頭和吸管，導致細胞交叉污染。