本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠孕酮（P）水平。用純化的小鼠孕酮（P）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入孕酮（P），再與 HRP標記的孕酮（P）抗體結合，形成抗體 -抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB顯色。 TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的孕酮（P）呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（ OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠孕酮（P）濃度。試劑盒組成

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標試劑	6ml×1瓶	8	標準品（ 1600ng/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔 × 8條	9	標準品稀釋液	1.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑 A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑 B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于 -20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。

4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復 5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻， 37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白空調零， 450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。測定應在加終止

800ng/L	5號標準品	150µl的原倍標準品加入 150µl標準品稀釋液
400ng/L	4號標準品	150µl的 5號標準品加入 150µl標準品稀釋液
200ng/L	3號標準品	150µl的 4號標準品加入 150µl標準品稀釋液
100ng/L	2號標準品	150µl的 3號標準品加入 150µl標準品稀釋液
50ng/L	1號標準品	150µl的 2號標準品加入 150µl標準品稀釋液

液后 15分鐘以內進行。操作程序總結：

計算

以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（ n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準 .

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。 10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期： 6個月

本公司：www.gelunbujp.cn ：何

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小鼠孕酮 （P）酶聯免疫分析試劑盒

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