葉綠體色素的提取及其分離方法

葉綠體色素的提取及其分離方法

層析液通過毛細(xì)作用擴散到色素線上時將色素溶解在層析液中，它們的溶解度是不一樣的，層析液在紙上繼續(xù)向前擴散的時候，會不斷揮發(fā)，因此其溶劑量會不斷減少，那么溶解度低的色素就會首先被析出呈現(xiàn)在紙上，而溶解度高的隨著層析液繼續(xù)往前擴散，在前面一點的地方析出。
至于為什么不會在相隔的兩條帶之間有色素，是因為層析液是緩慢減少的，而每一種色素其析出的濃度只有一個，所以只會形成一條帶。
你可以這么理解，層析液就像一輛公交車，在起點站載上了4種色素，每一種色素只能根據(jù)其自身性質(zhì)在某一個站下車，所以走過的痕跡中只有剛好達(dá)到某種色素析出的條件時才會析出沉淀到紙上。其他的地方層析液走過的時候確實帶著色素，但是色素這個時候處于可溶狀態(tài)，并不會在紙上留下痕跡。

1. 葉綠體色素的提取

（1） 取菠菜或其他植物新鮮葉片4-5片（2g左右），洗凈，擦干，去掉中脈剪碎，放入研缽中。

（2） 研缽中加入少量石英砂及碳酸鈣粉，加2-3ml 95%乙醇，研磨至糊狀，再加10-15ml 95%乙醇，離心35min，提取上清液過濾于三角瓶中，殘渣用10ml 95%乙醇沖洗，一同過濾于三角瓶中。

（3） 如無新鮮葉片，也可用事先制好的葉干粉提取。取新鮮葉片（以菠菜葉），先用105℃殺青，再在80℃下烘干，研成粉末，密閉儲存。用時稱葉粉2g放入小燒杯中，加95%乙醇20-30ml 浸提，并隨時攪動。待乙醇呈深綠色時，濾出浸提液備用。

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2. 葉綠體色素的分離

（1） 取圓形定性濾紙一張（直徑11cm），將其剪成濾紙條（9cm×3cm），用滴管吸取乙醇葉綠體色素提取液，沿紙條的長度方向涂在紙條的一邊（距邊約1cm），使色素擴散的寬度限制在0.5cm以內(nèi)，風(fēng)干后，再重復(fù)操作數(shù)次。

（2） 在層析缸中加入適量的推動劑，將濾紙條帶有色素的一端插入層析缸中，使濾紙條下端浸入推動劑中。迅速蓋好層析缸蓋。此時，推動劑借毛細(xì)管引力順濾紙條向上擴散，并把葉綠體色素向上推動，不久即可看到各種色素的條帶。

（3） 當(dāng)推動劑前沿接近濾紙邊緣時，取出濾紙，風(fēng)干，即可看到分離的各種色素：葉綠素a為藍(lán)綠色，葉綠素b為黃綠色，葉黃素為鮮黃色，胡蘿卜素為橙黃色。用鉛筆標(biāo)出各種色素的位置和名稱。

由上面的原理知道,在紙層析過程中,濾液細(xì)線中的色素是不會向下跑的,而是在毛細(xì)管拉力的作用下不斷向上跑,又因為不同的色素的分配系數(shù)不同,跑的距離也就不同.紙是用植物纖維做的,植物纖維里有毛細(xì)管,這是形成毛細(xì)拉力的先決條件,植物為什么可以將水分運送到高達(dá)數(shù)十米甚至數(shù)百米的樹頂,就是因為毛細(xì)管的拉力作用,制成紙后,這種拉力依然存在.