新的實驗項目已經(jīng)開始執(zhí)行策劃了，可能會有些實驗新手面對ELISA的時候有些不知所措，在這之前掌握一些相關(guān)資料是肯定需要的，我公司在前面的文章里面也介紹過不少，今天上海恒遠技術(shù)為您整理出了的試劑盒資料研究結(jié)果，一起來看下吧：
1. 在成批手工檢測中，還應(yīng)注意操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異，使抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng)時間不一致，對競爭法及定量檢測影響很大，不注意可能會導(dǎo)致錯誤結(jié)果或定量不準。
2. 加樣一般使用加液器，在ELISA中一般有4次加樣：加標本、加酶結(jié)合物、加底物和加終止液。加標本時必須每份標本使用一支移液器吸嘴，以免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和終止液時則不需更換吸嘴。
3. 洗滌是ELISA操作過程中決定實驗成敗的一個關(guān)鍵步驟。目的是除去未結(jié)合的免疫反應(yīng)物，終止抗原抗體反應(yīng)，除去標本中與反應(yīng)無關(guān)的成分、游離的酶標物以及反應(yīng)過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)。上海恒遠建議可用洗板機洗板或手工洗板，前者洗滌質(zhì)量較好，各反應(yīng)孔洗滌效果均一，批內(nèi)、批間差異小，手工洗板應(yīng)注意控制各孔洗滌效果，差異不宜太大。
4. 準確判定結(jié)果須使用ELISA測讀儀（酶標儀），比色法判讀可選擇單波長或雙波長，根據(jù)反應(yīng)液顏色的不同選用不同波長的濾光片，以空白孔校零測定反應(yīng)孔的吸光度值（A值）。酶標儀具有良好的重復(fù)性。
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本次的試劑盒資料中還包括了問題解決這一方面，我們首先來看下“邊緣效應(yīng)”這一問題。其實也就是外周孔顯色較 中心孔深。經(jīng)研究證實在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在實驗室的常規(guī)ELISA測定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)”了，并且可提高測定的重復(fù)性哦！
◇ 在ELISA實驗中，血清為什么要稀釋？
1. 競爭抑制比較明顯，應(yīng)稀釋競爭物；
2. 血清中含有的性腺激素比較低，應(yīng)該濃縮才對。
血清稀釋用普通的PBS即可，可加1％的BSA，能有效降低ELISA本底，當(dāng)然如果你嫌麻煩我覺得用生理鹽水替代PBS關(guān)系也不大。不管你是用直接競爭還是間接競爭，血清的稀釋倍數(shù)肯定要事先確定，但也不用一點點，你做一個預(yù)試驗即可，選擇OD在1.0左右的稀釋倍數(shù)，即你的競爭ELISA中陰性孔OD在1.0，這樣作出來的曲線比較敏感。
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ELISA試劑盒預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測定血清、血漿、組織勻漿或其它相關(guān)生物液體中目標蛋白含量。ELISA法由于本身所具備的*性，是一項很有發(fā)展前途的血清學(xué)診斷方法，應(yīng)用領(lǐng)域也越來越廣泛。可我們認為ELISA不是萬應(yīng)良方。因為ELISA法還是有局限性，ELISA中變異因素多，對于要診斷某一疾病時，必須進行一系列實驗室預(yù)試，摸索，或?qū)嶒炑芯浚Ｓ酶偁幏y定血清的溶度。
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