血清可溶性白介素的檢測方法

實驗目的

1.了解sIL-2R檢測的基本原理

2.掌握sIL-2R檢測的方法的臨床意義。

實驗原理

sIL-2R可與細胞膜表面的受體（IL-2R）競爭結合IL-2，從而成為一種免疫抑制物質。在正常人血清和尿液中可檢出低水平的sIL-2R，在某些疾病發生時如器官移植、排斥反應、病毒性感染、惡性腫瘤、創傷和自身免疫病等，sIL-2R在血清和其他體液中的水平增高，且與病情、病程密切相關。本實驗采用雙抗體夾心法測定原發性肝癌患者血清sIL-2R水平。（夾心法原理參見實驗五免疫酶技術）

即： 抗體-——待檢血清——抗體——酶標抗抗體——顯色

實驗用品

1.材料、試劑：待測人血清、IL-2Rα陽性、陰性參考血清、IL-2Rα單抗、兔抗IL-2Rα多克隆抗體、酶結合物（HRP-抗兔IgG）、顯色A液、B液、PBS洗滌液、終止液。

2.器具：吸管、滴管、試管、48孔聚苯乙烯反應板、50μl微量移液器、恒溫箱（370C）

實驗方法

預步驟：先用一定濃度的IL-2Rα單抗包被聚苯乙烯板的小孔，4℃冰箱過夜，次日取出甩盡液體備用。

（1）微量移液器分別加待檢血清、陽性對照、陰性對照各50μl于1、2、3孔中，370C水浴箱溫育40min。

（2）PBS液洗板3次，每次3min，甩干。

（3）每孔加入兔抗IL-2Rα多抗，370C水浴箱溫育30min。

（4）用PBS液洗板3次，每次3min，甩干

（5）每孔加入酶結合物（HRP-抗兔IgG）2滴，370C水浴箱溫育30min。

（6）每孔分別加入顯色A液、B液各1滴，混勻。370C水浴箱溫育5-10min。

取出肉眼觀察結果。如待檢血清溶液與陽性對照一致均為藍色，表明待檢血清為sIL-2R陽性血清。