不知不覺又迎來了新的一周，忙碌的工作有開啟的新的旅程，上海恒遠為在這新的周一里供應新品豬胰島素(Insulin)ELISA試劑盒。本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關液體樣本中胰島素(Insulin)含量，僅用于科研使用，不得用于臨床！小編帶您走進豬胰島素ELISA試劑盒，了解其實驗原理和實驗步驟！
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬胰島素(Insulin)水平。用純化的豬胰島素(Insulin)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加胰島素(Insulin)，再與HRP 標記的胰島素(Insulin)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素(Insulin)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中豬胰島素(Insulin)濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（160 mIU/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
80 mIU/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
40 mIU/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
20 mIU/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
10 mIU/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
5 mIU/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
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